重组肠激酶

肠激酶（Enterokinase, EK）是一种高度专一性识别 Asp-Asp-Asp-Asp-Lys 序列的蛋白酶，在 Lys 的 C端水解多肽。具有高度专一性，水解效率高的特点。可在较宽的 pH 范围(4.5~9.5)和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。可除去位于蛋白质 N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。重组肠激酶采用重组毕赤酵母高效分泌表达技术，经多级层析纯化，制成的高纯度、高活性重组牛肠激酶，不含其他蛋白酶。 产品优势 1、无动物源性：无动物病毒、无致病物质、无外源因子污染，安全性高。 2、 生产规模 1000L 以上。 3、 合规性：生产设备和生产环境符合相关法规要求，符合 GMP 指导原则。 4、质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。 产品特性 性状：无色至淡黄色澄明液体 pH：7.0~9.0 纯度：单一主条带 宿主蛋白残留： ≤100ng/mg pro. 外源性DNA残留 ：≤100ng/mg pro. 推荐使用方法 1、25℃酶切条件为：25mM Tris-HCl pH8.0 体系中融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白总量 50-100μg），重组EK 0.1~2U,酶切 16~24 小时，用 SDS-PAGE 检测酶切效果。 2、4℃酶切条件为：可在 4℃对底物进行有效低温酶切，但需要将酶切时间延长至 48~64 小时，或增加 2-3倍酶量。低温酶切有时候可获得比 25℃更好的酶切效果。 3、 在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果会受影响。可参照以下推荐方法进行酶切： 1） 为获得理想酶切结果，请将样品透析到 25mM Tris-HCl pH 8.0 缓冲液中，再进行酶切； 2） 若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在 100mM 以下，NaCl 浓度在 50mM 以下，甘油浓度 5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即 1U 酶切 500μg 蛋白）； 3） 如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。 4、可对酶切条件进行优化，例如缓冲液 pH，融合蛋白浓度，EK 的量，以及酶切时间，融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用 SDS-PAGE 检测酶切效果。 5、去除重组肠激酶的办法：可使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析去除重组肠激酶。 注意：不建议 37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。 运输和储存稳定性 1、运输稳定性：冰袋运输，活性稳定。 2、储存稳定性：-15℃及以下保存，24 个月稳定。25℃保存，一周内无活性损失。缓冲体系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mMCa2+，50%甘油。 3、冻融稳定性：反复冻融 5 次，无活性损失。 4、本品仅供研究使用，不得用于动物或人类的诊断或治疗。

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