UltraBio™ 293F Expression System (Plus)

UltraBio™ 293F 表达系统（Plus）可实现 HEK293 细胞株及其他293 细胞的高效率瞬时转染和蛋白表达。 使用方法 1. 推荐细胞培养条件 温度 36-38℃，湿度 80%，5-8%CO2 摇床设置：转速 115-125rpm（振幅 50mm） 2. 细胞复苏 2.1 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷冻的细胞； 2.2 将冷冻管中的细胞液全部转移到含有 30ml 预温过的 293F Hi-exp 培养基 的 125ml 摇瓶中； 2.3 放入 37℃，5-8% CO2，转速 115-125rpm（振幅 50mm），湿度 80%的摇床中培养。 3. 细胞传代 3.1 将 293F Hi-exp 培养基 放入 37℃条件下预热 20-30min。 3.2 取细胞密度≥3×106 - 4×106cells/ml、细胞活性≥95%、处于对数生长期中期的细胞进行传代； 【注意：不同类型的 HEK293 细胞可能具有不同的对数生长期范围。】 3.3 接种密度推荐：0.3×106 - 0.6×106cells/ml。 3.4 无菌转移所需量的种子液至合适体积的摇瓶中，并添加所需体积的已预热的 293F Hi-exp 培养基。 3.5 将摇瓶放入温度 37℃，湿度 80%，转速 115-125rpm（振幅50mm），5%-8%CO2的细胞培养摇床中进行培养。 【每 2-3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。】 4. 细胞驯化 4.1 直接接种法 ① 对于可以直接驯化的细胞，可以从无血清培养基中直接接种到 293F Hi-exp 培养基中，接种密度参考传代步骤。 ② 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。 ③ 传代几代之后，细胞密度在接种的 3-4 天内达到 3× 106cells/ml、细胞活性≥90%。此时，可以认为细胞已被驯化成功。 4.2 梯度驯化法 ① 如果直接驯化效果不佳，请尝试按照以下梯度驯化表格进行操作。 ② 选择低代次的细胞，并确保细胞处于对数期。 ③ 使用原始培养基培养细胞，并继续使用原始培养基传代 2-3 代，以实现稳定的细胞生长。 ④ 在完全使用 293F Hi-exp 培养基 接种 3-4 天之后，VCD应该稳定达到 3×106cells/ml，细胞活性≥90%。此时，细胞已经驯化到 293F Hi-exp 培养基 中。 293F Hi-exp 培养基：原始培养基（%）

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