YO425SE (YO425 succinimidyl ester)

提供多种性价比高的氨基反应染料，用于标记蛋白质和其他含胺化合物。YO Dye SE可以与氨基基团反应生成稳定的酰胺键。 产品参数： Absmax/Em(nm)：429/475；Absmax/Em(nm)：0.17；Extinction coefficient(ε)：45000；Optimal DOL(IgG)：2-3； 光谱图： 使用方法： 1. 实验材料 （ 1 ）蛋白溶液不可含有能与染料反应的胺类化学物质，如氨基酸、 Tris 、 BSA 、明胶等。如果蛋白中含有此类化学物质，应用 pH~7.4 的 PBS 缓冲液预先透析处理。低浓度 ( 叠氮化钠的存在不会产生干扰与标记反应。 （ 2 ）溶液 A ： PBS 缓冲液（ pH 7.4 ）。 （ 3 ）溶液 B ： 0.2 M NaHCO3 溶液，用 2 M NaOH 将 pH 值调至 9.0 。 （ 4 ）溶液 C ：向 20 份溶液 A 中加入 1 份溶液 B ，得到 pH 8.3 的标记缓冲液。保存在密封瓶中，该溶液可长期保持稳定。 （ 5 ） Sephadex G-25 凝胶过滤柱。 2. 标记方法和步骤 （ 1 ）将 1~5 mg 蛋白溶解在 1 mL 溶液 C 中。 （ 2 ）将 1 mg 染料溶解在 50–200 µL 无水、不含胺的 DMSO 中，充分震荡混匀。 （ 3 ）取适当体积的染料加入蛋白质溶液中，使染料 / 蛋白的摩尔比在 3: 1 ，由于蛋白质和标记试剂的不同反应性，可能会发生变化。这可能需要优化反应中使用的染料与蛋白质的比例，以获得所需的 DOL 。 （ 4 ）室温孵育 1 h 。对于 YO565 SE 建议孵育 18 h 以完成标记反应。 （ 5 ）用溶液 A 平衡葡聚糖凝胶 G-25 透析柱。 （ 6 ）将步骤（ 4 ）反应溶液加入柱子，并用溶液 A 洗脱。首先洗脱出来的着色带是染料 - 蛋白结合物。 注：为防止洗脱后偶联物发生变性，可添加牛血清白蛋白 (BSA) 或其他稳定剂。 3. DOL 计算 DOL = c (dye) /c (protein) = (Amax/εmax) / (Apro/εpro) = (Amax · εpro) / [(A280 – Amax ·Cf)·εmax] a. εpro 为蛋白的摩尔吸光系数； b. A280 和 Amax 分别是指在 280 nm 处的吸光度以及在最大吸收波长处的吸光度； c. Cf 是校正因子，参考上面表格； d. εmax 为染料的摩尔吸光系数。 注意事项： 1. 荧光染料激发与发射波长会受到溶剂的影响，使用不同溶剂，则激发与发射波长可能会发生变化。 2. 标记的蛋白如需储存，可以添加终浓度为2 mM NaN3作为防腐剂，放置于4℃避光保存。如需长期储存，请将溶液分成小份并在 -20℃ 下冷冻，避免反复冻融，尽可能保护染料偶联物免受光照。 3. 操作过程注意避光，避免产生气泡。 4. 层析柱装柱时，尽量使柱体均匀，柱面平整，无气泡、裂隙。 5. 上样时注意，当柱顶缓冲液与凝胶平面相切时再加样品，洗脱时，当样品走至与凝胶平面相切时再加洗脱液。 6. 影响标记效率的其他因素还包括：温度、反应时间、pH、荧光染料与蛋白的量等，需注意控制。 7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。 应用范围： 蛋白核酸标记染料 Uelandy provides a variety of cost-effective amino reactive dyes for labeling proteins and other amine containing compounds. YO dyeSE can react with amino groups to form stable amide bonds. Product parameters： Absmax/Em(nm)：429/475；Absmax/Em(nm)：0.17；Extinction coefficient(ε)：45000；Optimal DOL(IgG)：2-3 Spectrogram： ( Dissolved in DMSO ) Instruction： 1. Experimental materials (1) Protein solutions must not contain amine chemicals that can react with dyes, such as amino acids, Tris, BSA, gelatin, etc. If the protein contains such chemicals, PBS buffer with pH~7.4 should be used for pre dialysis treatment. The presence of low concentration ( Matters needing attention： 1. the excitation and emission wavelengths of fluorescent dyes will be affected by solvents. If different solvents are used, the excitation and emission wavelengths may change. 2. if the labeled protein needs to be stored, NaN3 with a final concentration of 2 mm can be added as a preservative and stored at 4 ℃ away from light. For long-term storage, please divide the solution into small portions and freeze at -20 ℃, avoid repeated freezing and thawing, and protect the dye conjugate from light as much as possible. 3. avoid light and bubbles during operation. 4. when installing the chromatographic column, try to make the column body uniform, the column surface flat, and free of bubbles and cracks. 5. pay attention to adding the sample when the column top buffer is tangent to the gel plane. When eluting, add the eluent when the sample is tangent to the gel plane. 6. other factors affecting the labeling efficiency also include temperature, reaction time, pH, the amount of fluorescent dye and protein, etc., which should be controlled. 7. for your safety and health, please wear laboratory clothes and disposable gloves. Scope of application： Protein nucleic acid labeling dye

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