UltraBio™昆虫活性蛋白抽提试剂

阿拉丁生产的 UltraBio™昆虫活性蛋白抽提试剂 (UltraBio™ Insect Active Protein Extraction Reagent) 是一种用于快速、高质量、高产量、高活性提取昆虫细胞如 Sf 9 和 Sf 21 等或昆虫组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的昆虫活性蛋白抽提试剂。本产品对于细胞浆的蛋白的抽提效果优于细胞核和细胞膜的蛋白。本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂(detergent)的缓冲液(含有 130mM NaCl, 25mM Tris-Cl, pH7.5)，既确保了蛋白能被高效抽提，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于行后续的蛋白活性分析检测或进一步的纯化。由于本产品能确保提取的蛋白样品的活性，所含的去垢剂比较温和，虽然对于膜蛋白也有很好的抽提效果，但对于一些难溶性蛋白的抽提效率相对较低。如果希望获得比较高的难溶性蛋白的得率，建议使用含有强去垢剂的适当抽提试剂。对于使用本产品抽提获得的蛋白溶液，如果希望去除其中的去垢剂，可以通过透析或超滤方法去除。本产品能够快速、温和、有效地抽提昆虫细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。例如，带有 His、GST、HA、Flag、Myc、V5 等标签蛋白的分离纯化，免疫印迹(Western blot)、免疫沉淀(Immunoprecipitation)、免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)和 ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)等常规生化分析，luciferase、β-gal、alkaline phosphatase、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)等报告基因 (Report gene)酶活性检测，PKA、PKC 和酪氨酸激酶(tyrosine kinase)等蛋白激酶活力的检测等方面的用途。 产品应用： 本产品能够快速、温和、有效地抽提昆虫细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。 产品优势： 本产品既确保了蛋白能被高效抽提，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于进行后续的蛋白活性分析检测或进一步的纯化。 使用说明： 1.溶液的准备。 取适量的UltraBio™昆虫活性蛋白抽提试剂，根据具体实验目的加入适量的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物 (P752091)，也可以根据实验目的选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物 (P775091) 。放置于冰浴备用。如有必要，可以考虑选购重组全能核酸酶 (O775185)，并添加到本产品中使最终浓度为 50U/ml 以降低抽提产物的粘稠度。 2.悬浮培养昆虫细胞的蛋白抽提。 a.收集细胞：对细胞进行计数，并确定总的细胞数。800g 室温离心 5min，弃上清。 b.洗涤细胞(可选做)：用 PBS 洗涤细胞，800g 室温离心 5min，弃上清。如有必要，可以再重复洗涤一次。 c.裂解细胞：弹击离心管底，使细胞沉淀适当分散开。每 0.5-2×107 个细胞加入冰浴预冷的 1ml UltraBio™昆虫活性蛋白抽提试剂，用移液器吹打混匀，再以中速涡悬震荡约 5 秒后置于冰上孵育 10min。如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加蛋白得率。 d.12,000-16,000g (16,000g 更佳) 4℃离心 15min。 e.将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。 3.贴壁培养昆虫细胞的蛋白抽提。 a.洗涤细胞(可选做)：吸除培养液，加入适量 PBS，轻轻摇动，吸除 PBS 重复洗涤一次。如有必要，可以再重复洗涤一次。洗涤过程中应尽量避免贴壁细胞的脱落，如果发生细胞脱落，可以收集相应的培养液或 PBS 溶液，800g 离心 5min，以沉淀并收集脱落的细胞。 b.裂解细胞：吸净细胞培养液或洗涤液，加入适量的 UltraBio™昆虫活性蛋白抽提试剂，冰上孵育 10min。冰上孵育期间，可以将培养器皿放置在水平或侧摆摇床上剧烈摇动、敲击细胞培养瓶细胞培养侧的外壁或用细胞刮刮下贴壁细胞。通常直接孵育 5-6min 后，昆虫细胞会逐渐出现从培养器皿表面脱落的现象。 不同规格的细胞培养器皿中昆虫活性蛋白抽提试剂的用量表。 Multiple Well Plates or Dishes

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