SDS-PAGE Protein Sample Loading Buffer (1X)

产品介绍： SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X) 是阿拉丁自主研发的一款更加安全无气味、以溴酚蓝为染料的改良型蛋白上样缓冲液。本产品从-20℃取出后可快速融化，不粘稠且节省时间；使用无味、更稳定的新型还原剂代替了DTT和β-巯基乙醇。适用于SDS-PAGE蛋白样品的上样操作，与常规的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液电泳效果基本一致。1X蛋白上样缓冲液可以用于直接裂解蛋白样品，方便快捷，但裂解好的蛋白样品不能用常规的Bradford法或BCA法测定蛋白浓度，所以需要借助考染或WB的检测结果来调整上样量。本产品也可以用于SDS-PAGE时待上样蛋白样品的稀释等。 使用说明： 1. 在 室温（10~30℃） 融化完全，并混匀。 注：如需要更快速使用，可置于37℃水浴或金属浴中融化，但尽量减少融化后水浴或金属浴放置时间。 2. 制备带上样蛋白样品： （1）对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250μL SDS-PAGE蛋白上样缓冲液( 1X)的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)和细胞充分接触。通常SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。裂解后的样品收集到一洁净离心管内。 （2）对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μL SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)的比例加入SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再进行裂解。 （3）对于组织样品： a. 把组织剪切成细小的碎片。 b. 按照每20mg组织加入150-250μL SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)的比例加入SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)。如果裂解不充分可以适当添加更多的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)的用量。 c. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 d. 充分裂解后，将样品收集到一洁净离心管内。 【注】如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 3. 将上述混合物放入100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 【注】煮沸前如果发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体，可以延长水浴加热时间至8-10分钟后可以确保该粘稠的半透明状物体消失，以便于后续的上样操作。 【注】如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组DNA含量较高，煮沸5-10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再煮沸5-10分钟或者加入适量SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (1X)后再煮沸3-5分钟。充分煮沸后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放，同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失，方便上样操作。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样即可。 5. 通常电泳至溴酚蓝到达胶的底端附近1cm处即可停止电泳。 注意事项： 1. 无气味款和含DTT款SDS-PAGE蛋白上样缓冲液因为含有的还原剂不同，个别蛋白的电泳结果可能会有差异。 2. 本产品含有变性剂，不适用于Native-PAGE。 3. 本产品必须完全融化混匀后再使用。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服和佩戴一次性手套。

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