compound introduction
类器官冻存液是一种即用型细胞冻存品，可用于常规细胞、原代细胞、干细胞和类器官等细胞样本的冻存，可有效提高细胞的冻存效率以及复苏后的细胞活率。该冻存液不含血清，不含任何动物来源成分，含有10% DMSO。 使用说明： 一、类器官（或细胞）冻存 为保证冻存质量，需用生长状态良好的类器官（或细胞）进行冻存实验。 1、收集类器官并经传代消化液消化至寡细胞团或单细胞悬液后，加入预冷的类器官冻存液，吹打混匀并迅速转移至冻存管中。 注： (1) 在收集类器官时，为避免枪头粘附性损耗，可将1mL移液枪头吹打抗粘附液进行润洗枪头。 (2) 每1mL冻存液推荐冻存1x10⁵-10x⁷ 个细胞或对应细胞量的类器官。 (3) 冻存前的类器官消化时间一般为3min，对于多层上皮且体积较大的类器官，应适当延长类器官消化时间。 2、将冻存管放入程序降温盒内（程序性降温盒须提前平衡至室温或4℃），随后立即将降温盒放入-80℃超低温冰箱中；也可将冻存管进行人工梯度降温处理，如4℃静置10min，-20℃保存1h，-80℃保存过夜。 3、次日或12h后将冻存管转移至液氮中长期存储。 二、类器官（或细胞）复苏 1、提前在37℃条件下预热类器官（或细胞）所需的培养基。 2、从冻存容器中取出细胞，在37℃的水浴中快速解冻至冻存管内存物仅剩少量冰渣残留时，转移至超净台内。 3、吸取冻存悬液至15mL锥形离心管中，加入5-10倍体积预热的基础培养基，轻轻混匀。 4、300g离心3min，观察确认是否有细胞沉淀，小心吸弃上清液而不干扰沉淀。 5、根据后续实验需求，使用适量的预热类器官完全培养基重悬细胞，用于后续类器官（或细胞）的培养。
