YO-PRO-1/RNase Staining Solution

YO-PRO-1/RNase细胞核染色液，是一种使用DNA绿色荧光染料YO-PRO-1在死细胞或经过通透处理的细胞中染色细胞核的染色液。YO-PRO-1，又名恶唑黄 (Oxazole yellow)，简称YP1，是一种非细胞膜穿透性的羰花青单体和DNA绿色荧光染料，在没有与DNA结合的时候基本上没有荧光，而与DNA结合后可以发出明亮的绿色荧光。在细胞凋亡发生时，细胞膜通透性发生改变，此时YO-PRO-1可以进入细胞内与DNA结合，发出明亮的绿色荧光。YO-PRO-1结合DNA后的最大激发光波长为491nm， 最大发射波长为509nm。 YO-PRO-1/RNase细胞核染色液为即用型染色液，无须稀释即可直接加入样品中进行凋亡与坏死细胞或经过通透处理的细胞的细胞核染色，十分便捷。RNase的存在可以充分消化细胞内的RNA，使染色效果更佳。 本染色液的10mL和50mL包装用于6孔板每孔检测体系为500μL时分别可以检测20次和100次； 用于96孔板每孔检测体系为100μL时分别可以检测100次和500次。实际检测次数会因为检测体系的大小而有所不同。 使用说明： 1、固定：使用组织固定液室温固定20-30min。对于固定的细胞或组织样品，固定后， 适当用PBS缓冲液洗涤去除固定液。 2、通透：使用配制在PBS中的0.1% Triton X-100 进行通透，室温5min。然后用 PBS缓冲液洗涤细胞2-3遍。如果用于染色凋亡或坏死细胞，则无需进行通透处理。 3、选做：按照免疫染色的方法进行抗体的孵育或用其它染料进行染色。 4、孵育： 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量YO-PRO-1/RNase细胞核染色液，轻轻晃动使染料均匀覆盖住样品即可。 对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。 37ºC避光孵育5-20min，以5min为初始孵育时间，后续可以根据实际染色效果对染色时间进行适当调整和优化，以得到更加理想的染色效果。 5、成像：弃去YO-PRO-1/RNase细胞核染色液，用PBS缓冲液洗涤2-3次，随后即可在荧光显微镜下观察或其它荧光检测系统检测。如果之前未经过通透处理，并且希望区分凋亡和坏死细胞，可以使用碘化丙啶 (PI) 进行复染，PI染色阳性的为坏死细胞，YO-PRO-1染色阳性的为凋亡与坏死细胞。 注意事项： 1、第一次使用前请将本品分装并于-20℃冻存，避免反复冻融。 2、染色液中含有RNase，如果使用比较频繁，可置于2-8℃保存，尽可能减少反复冻融次数。 3、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用本产品的过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。建议染色后尽量当天完成检测。 4、检测缓冲液应在无菌环境中使用，否则可能会被微生物污染而影响使用效果，甚至无法继续使用。 5、YO-PRO-1对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。 6、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 7、为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

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