马来酰亚胺活化型过氧化物酶（POD）

马来酰亚胺活化型过氧化物酶（POD）专为易于与含有或已修饰成含有巯基的化合物结合而设计。 此试剂预先活化，含有每摩尔过氧化物酶1.0-3.0摩尔马来酰亚胺，可直接偶联任何含巯基化合物，无需进一步修饰。马来酰亚胺与巯基的相互作用高度特异且高效，形成稳定的硫醚键。 处理说明 偶联方法： 1. 将产品复溶至2-5 mg/ml，溶于0.15 M氯化钠中，1 M磷酸钠pH 7.0。为了促进高效偶联，缓冲液使用前应脱气并用氮气或氩气吹扫。此外，制备缓冲液所用的水应不含微量重金属和其他氧化剂。 偶联反应可在棕色瓶中进行，以防止光线催化氧化。 2. 将待偶联的巯基化合物溶解于第1步中使用的相同缓冲液中，浓度为2-5 mg/ml。通常每摩尔巯基化合物应使用1-2摩尔过氧化物酶。过氧化物酶的分子量为40,000。 注意：如果偶联化合物是SATA 激活，按照参考文献应添加N-羟胺以启动偶联反应。 3. 在室温下轻轻搅拌3小时。 通过加入1 M 2-巯基乙醇至终浓 度为0.0015 M，阻断任何剩余的马来酰亚胺基团。 搅拌15分钟。 4. 通过加入0.3 M N-乙基马来酰亚胺来阻断任何剩余的巯基将N，N’-二甲基甲酰胺（DMF）加入至终浓度为0.003 M。 如果酶的天然巯基被阻断，一些酶可能会失去显著的活性。在这种情况下，应消除硫醇阻断步骤。 5. 然后通过色谱法或透析法将偶联物交换到适当的缓冲液中，以便将其置于所需的介质中使用。对于长期储存，应将偶联物与50%甘油一起储存在-20°C 下。 6. 出于分析目的，约5-10 μg结合物/ml将提供足够的信号用于检测。 *此程序通常允许与典型蛋白质高效结合。然而，在某些条件下，可能需要更高灵敏度的偶联物。 产品应用 1. 用于直接偶联到含有游离巯基团的化合物中，用作酶联检测试剂。 2. 马来酰亚胺化合物4-马来酰亚胺丁酸琥珀酰亚胺和6-马来酰亚胺己酸琥珀酰亚胺已被证明是Fab′与辣根过氧化物酶偶联的最有效方法。 3. 被用于一项研究，以调查其对线粒体蛋白脂酰胺脱氢酶的染色效果。 4. 提高免疫偶联物的信号强度，对免疫球蛋白进行了合成修饰，使其含有多个伯胺，并与马来酰亚胺激活的过氧化物酶共价结合。这可以导致更有效的偶联和信号放大。

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