分散酶II

Dispase II，中文名分散酶 II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II 还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性； 2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染； 3）稳定性强，不受温度、pH 及血清组分的影响； 4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。 本品非无菌 Dispase II，来源于 Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4U/mL 最佳 pH：6.0-8.5 使用说明： 1 母液及工作液配制 1）用 50 mM HEPES-KOH 缓冲液(pH 7.4, 150 mM NaCl)（60165ES）溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL 的储存液，用0.22 µM 滤膜过滤除菌。 2）使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。【注】不推荐使用高于 2.4 U/mL 的工作浓度。 2 组织的解离 1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块； 2）用无菌 PBS 清洗组织块； 3）向上述组织块中加入 Dispase II 溶液（工作浓度为 0.6-2.4 U/mL），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。 4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h 即可达到分离目的，但更长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。 5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜 dispase 溶液以进一步解离残留组织。 6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液； 7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。 3 细胞传代 1）利用 Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于 37℃孵育 5 min； 2）吸除上述溶液，继续于 37℃孵育 10 min； 3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育 15 min； 4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞； 5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。 The enzyme from Beyotime has been used in developing a protocol for ex vivo culture of mouse embryonic mammary buds. It has been used in the treatment of rat heart pieces during the isolation of mitochondria from rat heart.

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