Neural-27 Supplement

Neural-27 添加剂是一种经过优化的无血清添加剂，用于支持胚胎、产后和成体的海马神经元和其他中枢神经系统（CNS）神经元的生长，以及保持其短期或长期的活性。 Neural-27 添加剂以50×液体形式提供，加入到合适的神经元基础培养基后，一方面可用于基本单一化（ 使用说明 一、神经元培养基的配制（以50mL为例） 1、于2-8℃过夜解冻本产品。 【注】如果不立即使用，请分装并保存在-20℃，避免反复冻融。 2、Neural-27 添加剂是50×浓度。用前请用神经元基础培养基稀释到1×。即将1mL的 Neural-27 添加剂加入到49mL的基础培养基中，再添加0.5 mM L-谷氨酰胺，配制成神经元完全培养基。 3、对于原代海马神经元培养，神经元完全培养基需要额外补充25μM的L-谷氨酸，培养第4天换液成不含L-谷氨酸的神经元完全培养基。 【注】配制好的完全培养基，可于2-8℃避光保存一周。 二、细胞培养步骤 以下步骤经过大鼠胎儿原代海马和皮层神经元，以及神经母细胞瘤细胞系测试。 1、预冷无菌0.05 mg/mL多聚赖氨酸水溶液，用其均匀包被培养器皿表面，室温下放置1h。 2、去除包被液，无菌水冲洗2-3次。在超净工作台中打开培养器皿盖子通风，直到完全干燥。 干燥后可以立即使用或在2-8℃最多保存2周。 3、根据实验室标准程序或细胞说明书，分离或复苏原代大鼠神经元。 4、37°C预热神经元完全培养基，接种细胞，建议的细胞密度为160cells/mm²，或必要时使用自行优化的细胞密度。 【注】对于海马神经元，完全培养基中须添加25μM L-谷氨酸。 5、置于37℃，5% CO₂的恒湿培养箱中培养。 6、培养4-24小时后，更换一半体积的新鲜培养基，继续在培养箱中培养。 7、对于海马神经元以外的细胞：在接种4天后，更换一半体积的新鲜的完全培养基，之后每三天重复一次。对于海马神经元：接种3天后，用不含L-谷氨酸的新鲜的完全培养基更换一半体积的培养基。之后每三天重复一次。 【注】在完全培养基中添加25µM β-巯基乙醇，可提高海马神经元的长期存活率。 三、分离原代大鼠胚胎神经元 以下步骤推荐用于受精18天的大鼠胚胎海马神经元和大脑皮层神经元的分离培养。 1、从受精18天的大鼠胚胎中分离大脑皮层和双侧海马。 2、在已添加了Hibernate-E完全培养基（每对海马2mL）的离心管中收集所有组织。静置一段时间，直到所有的组织都已解体。 3、将组织沉在管底，然后去除上清液，只留下刚好可覆盖组织的少量培养基。 4、在不含Ca²⁺的Hibernate-E培养基中，使用2mg/mL无菌的木瓜蛋白酶溶液（每对海马2mL）， 30℃酶解组织约30min，中间每隔5min轻摇离心管使组织分散。 5、加入两倍体积的Hibernate-E完全培养基终止酶解。 6、静置，将未解离的组织沉降至管底，然后把上清液转移到15 mL离心管中，以150×g离心5 min。 7、用1mL神经元完全培养基重悬细胞沉淀，计数。然后按照“细胞培养步骤”的第4-7步骤进行。 产品优势： 1、无血清培养系统，优化配方。 2、注射用水配制，符合cGMP规定生产，工艺稳定，批差异小。 3、原料均选用自产或者经过严格检测和纯化的低内毒素高纯药用级别原料。 4、严格的质量检测程序，产品性能突出，指标媲美进口。 注意事项： 1、本品含有维生素A，如需培养神经干细胞，建议使用我司N778234。 2、本产品为无菌包装，请注意无菌取用。 3、为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

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