抗体法热启动DNA 聚合酶

A295123-1kit

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EnzymoPure™

产品简介 本品是 94 kDa 的耐热性 DNA 聚 合 酶， 通 过 将 Thermus aquaticus DNA Polymerase 的基因经克隆转化到大肠杆菌中进行表 达后，分离提取而得到的，与天然 Taq DNA 聚合酶具有相同的功能。 具有 5'→ 3' 聚合酶活性和 5'→ 3' 外切酶活性，但无 3'→ 5' 外切酶活性。 PCR 产物的 3' 端带 A，可克隆至 T 载体。AbTaq DNA polymerase 是基于Taq plus DNA polymerase升级改造的抗体法修饰热启动产品， 适用于探针法荧光定量 PCR。 产品组成 使用方法 1. 探针法荧光定量 PCR 反应体系 a. 引物推荐终浓度为 0.2 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 进行调整；引物长度请设定 18~25 bp，GC 含量为 40%~60%。最佳效率的扩增目标片段一般为 80~200 bp，设计时应尽量避免发夹结构、二聚体等复杂结构，并尽可能横跨内含子区域。 b. 探针终浓度推荐为 0.25 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 进行调整。 c. 模板添加量不应超过总反应体系的10%，推荐加样量为 1~2 μl。不同种类DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释， 以确定最佳的 DNA 模板添加量。 2. 探针法荧光定量 PCR 反应程序 质量控制 a.核酸内切酶残留检测：将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃ 温育 4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。 b.核酸外切酶残留检测：将酶液与双链 DNA 底物在 37℃ 温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。 c.宿主残留检测：将酶液中残留的核酸经 E.coli 16S rDNA 特异性的 TaqMan qPCR 检测，E.coli 基因组残留低于 10 拷贝。 d.功能检测：能有效扩增多种基因组中的单拷贝基因。