电击感受态细胞

Electroporation competent cells

E774103-200μl

200μL

-80℃储存

超低温冰袋运输

本产品是采用大肠杆菌 TG1 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株之一，主要用于构建噬菌体展示文库，也可用于构建克隆，蓝白斑筛选和蛋白表达等实验。 基因型： [F' traD36 proAB lacIqZ ΔM15] supE thi-1 Δ(lac-proAB) Δ(mcrB-hsdSM)5(rK - mK -) 产品特点 1．TG1 来源于 E. coli K-12 菌株，是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株之一，在平板上37℃，7 h 可见克隆。 2．菌株不含核酸酶 endA1 突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。 3．lacIqlacZΔM15 的存在使 TG1 可以进行蓝白斑筛选。 4．pUC19 质粒检测，转化效率可达 2×10^10 cfu/ug DNA。 使用说明 1．取 0.2cm 电击杯于冰中，冰浴 5 分钟充分降温。 2．取 200 μl 感受态细胞置于冰中 5 分钟，待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA，用移液器轻柔吹打混匀，避免产生气泡，混匀后立即插入冰中。 A．测定转化效率使用 10ng/μl 的对照质粒 PUC19。 B．对于连接产物，请用一定的方法脱盐后加入感受态中，DNA 浓度不超过 100ng/μl，体积不超过15μl /200μl 感受态。 3．用 200μl 枪头将感受态-DNA 混合液快速转移至电击杯中，避免产生气泡，盖好杯盖。 4．启动电击仪，设置参数：C=25μF, PC=200Ω, V=2.5kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯表面水分充分擦干后快速放入电击槽中进行电击。 5．电击结束后快速取出电击杯，打开杯盖，加入 1.5ml 不含抗生素的培养基，用 1ml移液器轻柔吹打混匀后，转移至 200ml 不含抗生素的培养基中，重复 4-5 次，直至电击杯中的感受态全部转移至200ml培养基中。 6．将 200ml 含菌液的培养基放入摇床，37℃，90rpm 复苏 60 分钟。 7．复苏后，从 200ml 菌液中取 4ml 用于梯度稀释，涂布于含抗生素的固体培养基平板上，倒置放于 37℃培养箱中过夜培养 13-17 小时。 8．剩余的菌液补加抗生素和终浓度 2%葡萄糖后放入摇床，37℃，220rpm 培养至 OD600＞3.5，进行离心浓缩收菌。 注意事项 1．加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。 2．电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。 3. 当 DNA 不纯或存在盐、乙醇、蛋白及缓冲液等污染时，转化效常急剧下降。 4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。 5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒，质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。 6. 对于连接产物转化，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。 7．混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 8．电击后的感受态细胞转移至培养基的过程应轻柔操作，避免用力过猛损伤细胞。 9．电击感受态细胞最好保存在-80°C 以下，高于-80°C 超期储存会导致转化效率下降。 保存条件 -80℃保存，干冰运输。