热启动Taq DNA 聚合酶

H292167-5KU

5KU

EnzymoPure™

5U/μL

产品说明： Hotstart Taq DNA Polymerase High-concentration是一种适体基团修饰的耐热性TAQ DNA聚合酶，高温加热前，适体修饰基团与Taq酶结合，抑制聚合酶的活性，避免了引物延伸的非特异性扩增或引物二聚体的产生，增强了DNA扩增的特异性、灵敏度和稳定性，可广泛适用于常规PCR、多重PCR及巢式PCR等。经过95℃热激10min后，该酶即可恢复活性。此外 Hotstart Taq DNA Polymerase High-concentration没有检测到3'→5'校对外切酶活性，但具有5'→3'外切酶活性，可用于荧光定量PCR的检测。Hotstart Taq DNA Polymerase High-concentration在常温下没有活性，便于PCR实验的常温操作。 产品内容： 1. Hotstart Taq DNA Polymerase High-concentration (10 U/μl ) 2. 5×Hotstart Taq Buffer（ Mg²⁺ Plus） 3. Solution I (10×) 活性定义：74℃，30 min，使 10 nmol dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为 1 个活性单位。 使用方法： 1. PCR 反应体系的设置： a. 溶解并混匀 PCR 反应所需的各种溶液。并放置于冰浴上或冰盒内。建议反应 PCR 液体分装使用，避免反复冻融。 b. 参考下表设置 PCR 反应,建议 PCR 反应体系的配置在冰浴或在冰盒上进行： ※ 模板 DNA 用量:为了保证反应的灵敏性，25 μl 体系使用 10⁴ 拷贝的靶序列作为模板，可参考下表计算需加入 PCR 体系的模板量。 1 μg 各种来源的 DNA 对应的摩尔数 例如：纯化的人类基因组 DNA 浓度为 1 μg/μl，某基因在人类基因组中拷贝数为 10，其单位体积拷贝数为： 3.0× 10⁵ mol/μg × 1 μg/μl × 10 copy/mol =3.0× 10⁶ copy/μl 1× 10⁴ copy/ (3.0× 10⁶ copy/μl) = 1/300 μl 即：1/300 ul 浓度为 1 ug/μl 的人类基因组 DNA 中含 10⁴ 拷贝该基因，稀释 300 倍后加 1μl 至 25 μl PCR 体系。为保证反应的特异性，DNA 终浓度应小于 10 ng/ul，过多的 DNA 可能会出现涂抹带甚至无特异性条带。 c. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。 d. 各设置好的 PCR 反应管置于 PCR 仪上，开始 PCR 反应。 2. PCR 反应参数的设置： 本产品是经过适体修饰型 Hotstart Taq DNA Polymerase High-concentration，为了使 PCR 的扩增效率、定量精度等达到最佳，建议热激时间为 95℃ ，10 分钟