超灵敏TMB显色液(ELISA HRP显色用)

单组份TMB ELISA 底物 SS

S743368-100ml

100ml

超灵敏TMB显色液(ELISA HRP显色用) (Supersensitive TMB Chromogen Solution for ELISA, Supersensitive TMB Substrate Solution for ELISA, Supersensitive TMB Solution for ELISA, or Ultra Sensitive TMB Chromogen Solution for ELISA)，简称超灵敏TMB或超敏TMB，是一种采用了最新单一溶液TMB显色技术，通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色，用于ELISA等的低背景、超灵敏显色液。本显色液也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。TMB，即3, 3´,5 ,5´-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB会产生可溶性蓝色产物1,2]。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。辣根过氧化物酶催化TMB显蓝色后可以使用阿拉丁的TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸) 、TMB显色终止液(650nm, 无腐蚀性) 或自行配制的2M H2SO4终止反应。加入TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸)或硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm测定吸光度；加入TMB显色终止液(650nm, 无腐蚀性)后，溶液保持蓝色不变，此时可在620-650nm测定吸光度。本显色液为即用型单组份溶液，无需另外添加过氧化氢等试剂。通常的TMB显色试剂由多个组份组成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致检测结果不太稳定。本显色液采用了最新的TMB显色技术，把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中，仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。本显色液为水溶液，其中不含DMF或DMSO等有机溶剂，也不含酒精，使用安全无毒。本产品和TMB显色液(ELISA HRP显色用) 相比，具有更快的反应速率和约3倍的检测灵敏度。本产品和P0209与相同浓度辣根过氧化物酶(HRP)标记Streptavidin反应速率和检测灵敏度的比较参见图1。图1.阿拉丁超灵敏TMB显色液(ELISA HRP显色用) 和TMB显色液(ELISA HRP显色用) 检测反应动力学和检测灵敏度的对比图。辣根过氧化物酶标记Streptavidin 用PBS进行稀释后，取20l加入孔板中，各加入100l P0209和本产品，使辣根过氧化物酶标记Streptavidin 的反应浓度为原液浓度的0.0001%，反应在25ºC下持续进行，并且每2分钟检测一次650nm处的吸光度。从结果可知，P0208反应速率约为P0209的3倍。实测数据会因试剂、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。本产品和TMB显色液(ELISA HRP显色用) 相比，具有更高的检测灵敏度和更低的检测下限。本产品和P0209对不同浓度辣根过氧化物酶(HRP)标记Streptavidin的检测效果参见图2。图2.阿拉丁超灵敏TMB显色液(ELISA HRP显色用) 和TMB显色液(ELISA HRP显色用) 检测效果图。将辣根过氧化物酶标记Streptavidin 用PBS进行梯度稀释后，各取20l加入孔板中，加入100l TMB显色液(ELISA HRP显色用) 或本产品，使HRP标记Streptavidin在反应中浓度如图中所示。室温避光孵育5分钟后，加入100l TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸) 终止反应，检测450nm处的吸光度。图A为使用本产品和P0209进行检测的标准曲线，HRP标记Streptavidin浓度为横坐标，A450为纵坐标，并进行了ELISA中常用到的四参数拟合(Four parameter logistic regression, 4PL)。图B为检测低浓度HRP标记Streptavidin的吸光度，并进行了线性拟合。从图中可见，在适宜的HRP浓度范围内，P0208的检测信号值约为P0209的3倍。实测数据会因试剂、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。本试剂盒最常用于ELISA检测，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。用于ELISA检测时，每个样品通常使用0.1毫升显色液，每100ml本产品共可以检测约1000个样品。4ºC避光保存，一年有效。本产品不推荐 使用说明 ： 1.对于ELSIA检测：a.使用前请将超灵敏TMB显色液(ELISA HRP显色用)平衡至室温。b.参考ELISA试剂盒的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。c.洗涤完毕后，去除洗涤液，加入100微升超灵敏TMB显色液。d.室温避光孵育3-30分钟，直至显色至预期深浅。本产品反应速度较快，如有必要可适当缩短反应时间。e.直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入100微升阿拉丁的TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸) 或TMB显色终止液(650nm, 无腐蚀性) ，或自行配制2M H2SO4终止反应，随后在相应波长测定吸光度。2.对于在96孔板内进行的其它适当检测 (例如检测组织或细胞样品内源性的过氧化物酶)：a.直接在96孔板内每孔加入10-20微升样品。b.加入100微升超灵敏TMB显色液。c.室温避光孵育3-30分钟或更长时间，直至显色至预期深浅。d.直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入100微升阿拉丁的TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸) 或TMB显色终止液(650nm, 无腐蚀性) ，或自行配制2M H2SO4终止反应，随后在相应波长测定吸光度。常见问题：1.背景显色太深。a.如果背景(没有样品的对照)显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。b.可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。2.没有显色或显色太弱。a.适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否可以被正常显色。b.可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。c.可以适当延长显色时间。d.如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。参考文献：1.Josephy PD, Eling T, Mason RP. J Biol Chem. 1982. 257(7):3669–3675.2.Liem HH, Cardenas F, Tavassoli M, Poh-Fitzpatrick MB, Muller-Eberhard U. Anal Biochem. 1979. 98(2):388–393. Precautions：Aladdin 's series of TMB ELISA substrates have the characteristics of low background, stability, small batch difference, and optional sensitivity. They provide superior signal reaction systems and are suitable for the development and production applications of ELISA kits. The one-component TMB ELISA substrate SS is a hypersensitive TMB substrate, which has the highest sensitivity in this series of TMB ELISA substrates, and has the characteristics of low background and stability. It is suitable for the detection experiment with color development time of 2-10 minutes, and is recommended for qualitative detection. Instructions for Use ： Application: ELISA. This product should be balanced to the reaction temperature before use. Coloration steps : 450nm reading : 1.Wash the plate, after HRP enzyme-labeled incubation, wash the plate with PBST / TBST washing buffer ( containing surfactant ) three times. 2.Color, add 100μL substrate, incubate at 20 ~ 37 °C for a certain time, the color is blue. 3.Termination : 100μL TMB termination solution 450 was added, and the color turned yellow. 4.Reading : It is recommended to read the absorbance value at the wavelength of 450 within 30 minutes. 650nm reading : 1.Wash the plate, after HRP enzyme-labeled incubation, wash the plate with PBST / TBST washing buffer ( including surfactant ) three times. 2.Color development, add 100μL substrate, incubate at 20 ~ 37 °C for a certain time, the color is blue. 3.Termination : 100μL TMB termination solution 650 was added, and the color was blue. 4.Reading : It is recommended to read the absorbance value at the wavelength of 650 within 30 minutes. kinetics 650nm reading : 1.Wash the plate, after HRP enzyme-labeled incubation, wash the plate with PBST / TBST washing buffer ( including surfactant ) three times. 2.Color development, add 100μL substrate, incubate at 20 ~ 37 °C. 3.Reading : according to the established frequency ( such as every 1 minute ) read the absorption value at the wavelength of 650 nm.